一、 實驗前準(zhǔn)備

1. 器材準(zhǔn)備： 準(zhǔn)備無菌的手術(shù)刀、手術(shù)剪、鑷子、50mL 或 15mL 圓錐底離心管、無菌培養(yǎng)皿。

2. 試劑檢查： 確認(rèn) 美天旎 MACS 組織儲存溶液 (130-100-008) 包裝完好，溶液清澈透明，無渾濁或沉淀。該試劑為即用型，無需稀釋或過濾除菌（除非包裝已打開）。

3. 環(huán)境控制： 所有操作步驟建議在生物安全柜（超凈臺）內(nèi)進行，以維持無菌環(huán)境。

二、 標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP）

步驟 1：組織采集與初步清洗

• 操作要點： 輕輕晃動培養(yǎng)皿，洗去組織表面殘留的血液、壞死碎片或污染物。這一步對于防止細菌污染和非特異性細胞粘附至關(guān)重要。

步驟 2：組織修剪與切塊

• 關(guān)鍵參數(shù)： 建議將組織切成直徑或邊長約為 3mm - 6mm 的小塊。

• 注意事項：

• 切勿過?。?/span> 小于 2mm 的碎塊會增加細胞損傷的風(fēng)險，且邊緣細胞容易死亡。

• 切勿過大： 超過 1cm 的大塊會導(dǎo)致溶液無法滲透到組織中心，造成核心壞死。

• 去除明顯的壞死組織、鈣化點及過多的脂肪組織（除非脂肪是研究對象）。

步驟 3：浸泡與儲存

• 體積配比： 建議按照 1mL 比例對應(yīng) 0.5g - 1g 組織的比例添加溶液。

• wan全浸沒： 確保所有組織塊wan全浸沒在液面以下。如有漂浮組織，可輕輕壓下或增加溶液量。

步驟 4：溫控與運輸

• 儲存溫度： 立即將離心管置于 2-8°C（冰箱冷藏層）環(huán)境中。

• 嚴(yán)禁冷凍： 絕對不可將溶液放入 - 20°C 或 - 80°C 冷凍，冷凍會破壞細胞滲透壓，導(dǎo)致細胞破裂。

• 運輸要求： 若需異地運輸，應(yīng)使用冷藏箱配合冰袋或藍冰進行冷鏈運輸，確保全程溫度維持在 2-8°C。避免組織直接接觸冰袋，以防局部凍傷。

步驟 5：后續(xù)處理（解離）

• 取出組織： 無菌條件下取出組織塊。

• 清洗（可選）： 可用冷 PBS 沖洗一次，以去除殘留的儲存液。

• 開始解離： 立即使用美天旎 MACS 組織解離試劑盒及相關(guān)程序進行機械法和酶法解離。

三、 關(guān)鍵注意事項與技巧

1. 時間窗口管理：雖然 美天旎 MACS 組織儲存溶液 (130-100-008) 支持最長 48 小時的保存，但為了獲得最佳細胞活力，建議在 24 小時內(nèi) 完成解離處理。保存時間越長，雖然活細胞比例尚可，但某些敏感的細胞亞群可能會逐漸減少。
2. 避免反復(fù)凍融：該試劑通常為 100mL 或 500mL 大包裝。建議根據(jù)單次使用量進行無菌分裝，避免反復(fù)開啟瓶蓋造成污染。分裝后的試劑在 2-8°C 密封保存，有效期可達數(shù)月（具體請參照瓶標(biāo)簽）。
3. 兼容性說明：該溶液專為保存未處理的新鮮組織設(shè)計。切勿將已經(jīng)制備好的單細胞懸液重懸于該溶液中長期保存，單細胞應(yīng)使用專用的細胞凍存液或含血清培養(yǎng)基處理。
4. 抗干擾能力：如果組織樣本污染嚴(yán)重（如含有大量膿液或壞死組織），建議先進行更ce底的清洗，或考慮在溶液中添加適量的雙抗（青霉素 - 鏈霉素），盡管 MACS 組織儲存溶液本身具有一定的抑菌輔助作用（通過低溫環(huán)境），但并非抗生素溶液。

四、 常見問題解答（FAQ）

• Q: 使用該溶液后，解離出的細胞得率低是什么原因？

• A: 可能是組織切塊過大，導(dǎo)致中心細胞缺氧死亡；或者保存時間超過了 48 小時。請檢查切割尺寸和保存時長。

• Q: 可以將組織從該溶液中取出后放入 - 80°C 凍存嗎？

• A: 可以。該溶液主要用于低溫運輸和短期暫存。如果您需要長期凍存組織，可以從該溶液中取出組織，吸干液體后放入專用的組織凍存液（如含 10% DMSO 的 FBS）中程序降溫凍存。

• Q: 該溶液是否適合所有類型的組織？

• A: 適用于大多數(shù)實體組織，如腫瘤、皮膚、肌肉、淋巴結(jié)、脾臟、腦組織等。對于全血樣本，請使用專門的抗凝劑，而非組織儲存溶液。

五、 總結(jié)